本发明提供一种单分散超顺磁性羧基硅磁珠及其制备方法,属于磁性材料制备技术领域。该制备方法包括 : 将Fe3O4纳米团簇分散于醇溶液中,再加入氨水和TEOS,搅拌4‑6h,得到直径为100~240nm的Fe3O4@SiO2复合物;再将Fe3O4@SiO2复合物分散于醇溶液中,加入丙烯酸类化合物和丙烯酰胺,随后在氮气保护下与引发剂和交联剂混合,于65~80℃下反应8~12小时,得到Fe3O4@SiO2‑COOH复合粒子。该制备方法简单,可控性强,制得的磁珠具有均一粒径、分散性好、超顺磁性,且能与蛋白质特异性结合,可进一步用于蛋白质等生物大分子的分离。