本发明提供了一类酰肼类发光染料及其制备方法和应用,属于精细化工技术领域。本发明提供的酰肼类发光染料属于有机小分子共轭体系,易于通过廉价易得的原料简单合成,同时,其结构中包含的可修饰化学位点多,易于进行进一步功能性修饰;其在适当化学条件下会触发强劲的绿色或黄色化学发光,具有良好的抗干扰能力;对活性氧物种和特定金属离子具有优异的灵敏度和高选择性,可作为二者的灵敏化学发光检测;其还具有良好的荧光性能,荧光强度表现出对pH值和粘度的灵敏响应,使其兼具定性和定量分析的能力,可用于生物体内基于pH和粘度的特异性荧光成像,且因其化学发光无需外源性激发光源,可应用于生物体内的高分辨原位化学发光成像。